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饲料酵母中贴壁细胞的保藏方法

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饲料酵母中贴壁细胞的保藏方法

发布日期:2019-08-15 00:00 来源:http://www.hbxdsw.com 点击:

    饲料酵母中贴壁细胞的保藏方法:

    1、观察细胞状态。贴壁细胞密度达到80%,即可以细胞冻存形式进行保藏,拍照,记录细胞状态;

    2、细胞清洗。培养皿表面消毒后,转移至生物安全柜中,去除培养皿中培养液,加入12mlPBS,轻轻摇晃培养皿清洗细胞,随后吸除PBS清洗液;

    3、细胞消化。2ml胰酶加入培养皿中,完全覆盖细胞,置于显微镜下观察(期间禁止摇晃培养皿),当细胞刚开始脱落时,立即转移至生物安全柜中,除去大部分胰酶,剩余约0.5ml胰酶,转移至培养箱内继续消化,每30秒肉眼观察细胞状态,至细胞成流沙状完全脱落,转移至生物安全柜中,加入12ml完全培养基,终止消化;

    4、细胞离心。将终止消化后的细胞悬液吹打均匀,吸取至15ml离心管中,1000r/min110g),离心3min

    5、细胞冻存。离心后去除细胞上清液,按照冻存细胞量5*10^5/ml,吸取冻存液重悬细胞沉淀,吹打均匀后分装至相应的冻存管中,进行冻存;

    6、细胞保藏。饲料酵母冻存管做好标记,放至程序降温盒中,于4℃冰箱放置30min,转移至-80℃超低温冰箱过夜,将过夜后的冻存细胞转移至液氮中保藏。

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